Кількісна полімеразна ланцюгова реакція зворотної транскрипції (RT-qPCR) є найбільш чутливим методом кількісного визначення мРНК 3, оскільки дозволяє виявляти рідкісні транскрипти та спостерігати невеликі варіації експресії генів.15 квітня 2009

Переваги: ​​1) RT-PCR має висока чутливість за рахунок експоненціальної ампліфікації матричної РНК. 2) ЗТ-ПЛР є дуже специфічною при використанні геноспецифічних праймерів у синтезі кДНК. 3) Техніка RT-PCR може бути виконана протягом одного-двох робочих днів, що забезпечує швидкі результати.

Основними перевагами КПЦР є те, що вона забезпечує швидке та високопродуктивне виявлення та кількісне визначення цільових послідовностей ДНК у різних матрицях. Меншому часу ампліфікації сприяє одночасна ампліфікація та візуалізація новоутворених ампліконів ДНК.

КПЦР вимагає знання даних про послідовність конкретного гена-мішені, який цікавить, але забезпечує дуже високу специфічність [35] . Однак адекватне використання КПЦР для кількісного визначення бактерій вимагає використання екзогенних контролів для нормалізації результатів, що часто ігнорується в багатьох мікробіологічних дослідженнях [36]. …

ПЛР у реальному часі має ряд переваг перед звичайною ПЛР, в т.ч точна кількісна оцінка в широкому динамічному діапазоні, відсутність потреби в обробці зразків після ПЛР (що зменшує трудомісткість і ризик зараження), а при використанні зондів, специфічних для послідовності, покращена специфічність.

RT-PCR використовує зворотну транскрипцію для отримання шаблону ДНК з джерела РНК, який потім можна ампліфікувати. ПЛР і RT-PCR зазвичай є кінцевими реакціями, тоді як qPCR і RT-qPCR використовують кінетику швидкості синтезу продукту під час реакції ПЛР для кількісного визначення кількості присутньої матриці.

У одноетапній RT-PCR у реальному часі етап RT поєднується з ПЛР.У цьому процесі РНК зворотно транскрибується в кДНК, а потім ампліфікується в одній реакції. Основними перевагами цього методу є швидкість налаштування, дешевизна та потреба в меншому обігу зразків для зменшення помилок піпетування та забруднення.