Барвники Alexa Fluor® являють собою велику групу негативно заряджених і гідрофільних флуоресцентних барвників, які часто використовуються в
. Усі барвники Alexa Fluor® є сульфованими формами різних основних флуоресцентних речовин, таких як флуоресцеїн, кумарин, ціанін або родамін (наприклад, Alexa Fluor®546, Alexa Fluor®633).
флуоресцеїн ізотіоціанат (FITC) Найбільш використовуваним флуоресцентним барвником є флуоресцеїну ізотіоціанат (FITC), з піком збудження/випромінювання при 495/517 нм. FITC зв’язується з аміном на білку, уможливлюючи позначення білкових субстратів/пептидів і антитіл.');})();(function(){window.jsl.dh('oSHbZtPSAqOyhbIP4OO9qQ4__26','
Флуоресцентні молекули використовуються як замінники радіоізотопних або ферментних міток. Техніка флуоресцентних антитіл полягає в міченні антитіл такими барвниками, як флуоресцеїну ізотіоціанат (FITC). Ці сполуки мають високу спорідненість до білків, з якими вони кон'югують.
У класичному FIA флуоресцентні барвники, які висвітлюються УФ-світлом, використовуються для виявлення специфічного зв’язування антигену та антитіла. Флуоресцентні барвники, флуоресцеїну ізотіоціанат і лізамін родамін випромінюють синьо-зелену та оранжево-червону флуоресценцію відповідно під ультрафіолетовими променями у флуоресцентному мікроскопі.
Ці барвники можна згрупувати в такі категорії, як органічні барвники (наприклад, флуоресцеїн, родамін, AMCA), біологічні флуорофори (наприклад, зелений флуоресцентний білок, фікоеритрин, алофікоціанін) і квантові точки.
Таблиця 1
| Зразки флуоресцентних барвників | Збудження | емісія |
|---|---|---|
| BFP (блакитний флуоресцентний білок) | 380 нм | 439 нм |
| Alexa 350 | 343 нм | 441 нм |
| 7-аміно-4-метилкумарин рН 7,0 | 346 нм | 442 нм |
| Аміно кумарин | 345 нм | 442 нм |
Ось найважливіші аспекти, які слід враховувати при виборі флуоресцентного барвника:
- Коефіцієнт екстинкції на довжині хвилі збудження повинен бути якомога вищим. …
- Квантовий вихід має бути якомога вищим. …
- Флуоресцентний барвник повинен бути фотостабільним. …
- Фотохромна поведінка. …
- Проникність живих/мертвих клітин.